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荧光定量PCR中常见的8种对照
时间:2024-12-23 16:07:32
答案

荧光定量PCR中的对照策略至关重要,它监控着实验的各个环节。实验流程通常包括样品采集、处理、扩增等步骤,每一步都对应着特定的对照类型。以下是其中8种常见的对照:

1. 阳性对照(PC)和阴性对照(NC):确保处理过程的准确性和样品状态。阳性和阴性样本用于验证实验系统的有效性。

2. 扩增对照:包括扩增阳性对照和扩增阴性对照,前者含有扩增模板,后者不含,用于监控扩增反应的准确性。

3. 内标(IC):分为内参基因和人工内标,内参基因如GAPDH等在样本中表达稳定,监控整个处理过程;人工内标则在样本提取后添加,不能监控所有步骤。

4. 核酸提取和反转录对照:用于监控这些关键步骤。

5. 空白对照:包括无模板空白、仪器空白和荧光染料对照,分别检查模板、系统污染和荧光校准。

6. 质控品和定值参考品:第三方或标准物质,确保整个实验流程的准确性和一致性。

对照的选择应根据实验需求灵活,例如初筛和确诊实验中,对敏感性和特异性要求不同,对照策略也会有所区别。同时,阳性对照的使用需谨慎,以防增加实验室污染风险。

通过这些对照,荧光定量PCR的结果更加可靠,确保实验数据的准确性和可重复性。

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