线粒体膜电位检测是一种通过利用特定试剂盒进行细胞、组织或纯化线粒体膜电位变化的快速、灵敏检测技术,广泛应用于线粒体健康状态评估和细胞早期凋亡检测。
关键荧光探针JC-1用于检测线粒体膜电位△Ψm。正常情况下,JC-1在线粒体内积累形成聚合物,发出强烈的红色荧光;线粒体膜电位下降或丧失时,JC-1只能以单体形式存在于胞浆中,产生绿色荧光。颜色变化直接反映了线粒体膜电位的变化,膜电位的破坏是细胞凋亡早期的标志性事件。
通过检测线粒体膜电位变化,可以评估细胞的健康状态和凋亡过程。线粒体膜电位的破坏导致膜通透性改变,释放线粒体蛋白如细胞色素C、Smac/DIABLO等,引发细胞凋亡酶的级联效应,最终导致细胞凋亡。
进行线粒体膜电位检测实验时,需要准备线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)、倒置荧光显微镜和细胞培养箱等仪器。实验步骤包括:
1. 配制JC-1染色工作液,先稀释JC-1,再加入染色缓冲液,充分混匀。
2. 设置阳性对照,使用CCCP处理细胞,观察线粒体膜电位变化。
3. 对悬浮细胞和贴壁细胞进行染色、培养和离心,最终使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计或流式细胞仪检测线粒体膜电位。
检测结果通过荧光强度变化判断线粒体膜电位状态,出现绿色荧光表示线粒体膜电位下降,可能处于细胞凋亡早期;出现红色荧光则表示线粒体膜电位正常,细胞状态良好。