纸色谱法是以纸作为载体的色谱法。按分离原理属于分配色谱法的范畴。固定相一般为滤纸纤维上吸附的水分，流动相(展开剂)为有机溶剂。除水以外，滤纸也可以吸留其他物质，如甲酰胺或缓冲溶液等作为固定相。

纸色谱法的一般操作与薄层色谱法相似，即在层析滤纸条的一端(约2cm处)，点加样品溶液适量，待干后，将滤纸悬挂于密闭的层析缸内，使滤纸被展开剂蒸气所饱和，然后使展开剂从点有样品的一端，借毛细管的作用缓缓流向另一端，在此过程中各组分随着展开剂的向前移动在两相间进行分配。经过适当时间后，取出滤纸条，画出溶剂前沿，干燥。若待测组分为有色物质则可以观察到有色斑点；若待测组分为无色物质，可用适当的方法进行显色，以观察斑点。

纸色谱法可视为溶质在固定相和流动相之间的连续分配(萃取)的过程。由于组分在两相间的分配系数不同，因而随展开剂迁移的速度不同而达到分离的目的。